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本产品是在根据细菌特点设计的细菌总RNA提取试剂盒。它基于异硫氰酸胍/酚/氯仿提取RNA原理，可用于包括E.coli、Campylobacter fetus、Pseudomonas aeruginosa、Rhodobacter sphaeroides等各种常见的革氏阴性细菌。如果需要提革氏阳性细菌（如Bacillus subtilis、Staphylococcus aureus等）的RNA，可以选择本公司的真菌RNA纯化试剂盒。

• 操作简单快速，只要十分钟左右，可以全在室温下进行。
  
• 所得RNA质量高，OD260/OD280一般在1.9，基因DNA污染低。
  
• 灵敏度高，可以从一个菌落中提取到普通电泳能够检测到的总RNA。
  
• 性价比高于进口同类产品。
  
• 本产品足够50次微量提取。
  
• 本产品只能用于科研。

• 在1.5mL塑料离心管中离心收集0.2～1.5mL新鲜细菌(注意:由于细菌RNA半衰期十分短，所以必须使用最新鲜细菌)，吸尽液体培养基，加入1mL细菌RNA纯化溶液并用枪充分吹打，确保细菌全部裂解并且没有块状物。
  如果使用菌落，则用接种环小心将其转移到装有1mL细菌RNA纯化溶液的1.5mL塑料离心管中，用移液枪吹打均匀。在细菌数较少时，建议使用核酸助沉剂以提高RNA回收率。
  
• 加入0.2mL氯仿，在振荡器上充分振荡混均30秒（必须将管底的液体振荡起来，否则不能有效将DNA打断和去除蛋白质）。
  
• 14000g室温离心3分钟。上清液无色，下层液呈篮色，中间为蛋白质。小心将上清液转移到另一干净1.5mL塑料离心管中，上清液体积约为0.6mL。为避免触及中间层的DNA和蛋白质，建议分小量多次吸取，并且只取0.5mL，留0.1mL左右不取。当细菌数量较少时，中间层将十分松散，上清时很容易吸到下层有机相，需要更加小心。
  
• 在上清液中加入等体积的异丙醇，振荡器上振荡混均30秒。
  
• 14000室温离心3～10分钟，RNA将在管底侧面形成沉淀。
  
• 小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
  
• 在离心管中加入1mL 75%乙醇，振荡器上振荡混均30秒。
  
• 14000g室温离心1分钟。
  
• 小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
  
• 短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留液（约50μL）。
  
• 室温开盖短暂放1～2分钟后加入适量RNA-free水使RNA沉淀溶解。所得RNA溶液可以立即使用或存放于-80℃长期保存。
  
• RNA完整性的电泳检测：
  如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。如果是简单检测，可以使用TAE电泳液，但文献报道必须使用变性上样液（BioTechniques，9：558，1990）。普通DNA上样液不含变性剂，也没经过去RNase处理，所以最好不要使用。尤其需要注意的是不要使用TBE进行RNA电泳，因为TBE所含硼酸是研究多糖的经典方法----硼酸络合法中的关键成分，硼酸通过与RNA核糖中的羟基发生络合反应，形成RNA分子内或RNA分子间的络合复合物，使同样长度的RNA具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有大的RNA络合复合物迟留在加样孔中（一般会误以为是基因组DNA污染）。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼酸与RNA的数量比例有关，而RNA样品中污染的其他多糖（如植物中提取的RNA）也会参与此反应，使硼酸对RNA电泳的影响更复杂，所以TBE对RNA电泳的影响没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行，最好是避免使用。
  由于细菌细胞中70～80%的RNA为rRNA，后者又由23S (约3700nt)，16S (约1700nt)和5S (约100nt)三种组成，所以变性胶电泳后应该在UV下看见三条清晰的rRNA带。由于核酸长度与结合EB的数量成正比（当然还与RNA的二级结构有关，双链部分结合能力比单链部分强），所以23S rRNA条带的荧光强度一般比16S rRNA条带的荧光强度强2倍。
  如果这两条rRNA带不清晰或比例小于此范围则表示RNA有降解（因为大的RNA被酶降解的可能更大）。
  
• RNA产量产率测定：
  将5～10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5～8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40μg/mL），进而计算出RNA的产量和产率。注意不要将RNA稀释在DEPC水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE中测得的低10%～15%，因为核酸光吸收跟溶液pH相关，而DEPC水中的DEPC高压分解后产生的CO2与水反应生成碳酸，使溶液pH降低进而降低RNA的光吸收。
  
• RNA纯度测定：
  无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8～2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0～2.3之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/氯仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用DNA清除剂和PS清除剂去除。